HPLC: merjenje čistosti
HPLC loči komponente v tekočem vzorcu. Vzorec potuje skozi kolono C18, UV detektor meri absorpcijo pri 220 nm. Rezultat je kromatogram, graf z vrhovi. Glavni vrh je ciljni peptid, manjši vrhovi so nečistoče. Peptid.si dosega povprečno čistost 99,9 %.
Masna spektrometrija: potrditev identitete
MS meri molekulsko maso na decimalko. Vsak peptid ima znano teoretično maso. Za BPC-157 je 1.419,5 Da, TB-500 4.963 Da, GHK-Cu 403,9 Da in Ipamorelin 711,9 Da. Brez MS analize peptid identitete nima dokazane, tudi če je HPLC čistost visoka.
Dodatna testiranja
Zanesljivi dobavitelji izvajajo še testiranje endotoksinov (LAL metoda, mejna vrednost <5 EU/mg), težkih kovin (arzen, kadmij, živo srebro, svinec) in bioburden za mikrobno kontaminacijo.
Kaj to pomeni za izbiro dobavitelja?
Pri izbiri dobavitelja preveri: neodvisno testiranje v zunanjem laboratoriju, serijsko specifične COA, dostopne kromatograme in MS podatke. Vse to je javno na voljo v COA Vault na peptid.si.
Reference / Viri
- Mant CT, Chen Y, Yan Z, Popa TV, et al. (2007). HPLC analysis and purification of peptides. Methods Mol Biol. PubMed
- Yang Y, Boysen RI, Chowdhury J, Alam A, Hearn MTW (2015). Analysis of peptides and protein digests by reversed phase HPLC-electrospray ionisation mass spectrometry using neutral pH elution conditions. Anal Chim Acta. ScienceDirect
- Zhang H, Liu Q, Zimmerman LJ, Ham AJL, et al. (2011). Methods for peptide and protein quantitation by liquid chromatography-multiple reaction monitoring mass spectrometry. Mol Cell Proteomics. PubMed
- Wojtkiewicz M, Berg Luecke L, Kelly MI, Gundry RL (2021). Facile Preparation of Peptides for Mass Spectrometry Analysis in Bottom-Up Proteomics Workflows. Curr Protoc. PubMed
- Udeshi ND, Compton PD, Shabanowitz J, Hunt DF, Rose KL (2008). Methods for analyzing peptides and proteins on a chromatographic timescale by electron-transfer dissociation mass spectrometry. Nat Protoc. Nature
